loxp鼠的构建主要是通过基因打靶的原理，将loxp位点插入到目的基因两侧的内含子中，该插入基因的存在不会引起原基因序列表达的改变。为了提高筛选效率，同时插入阳性标记neo基因和作为负性筛选的DTA，将构建成功的载体，通过电转的方式转入ES细胞，通过对中靶的ES细胞进行筛选和鉴定，得到同源重组正确的阳性克隆。通过显微注射的方式，将中靶的阳性细胞导入囊胚，将囊胚移植到代孕母鼠的子宫内，小鼠出生后经PCR筛选鉴定即可得到嵌合体flox小鼠。将此嵌合体flox小鼠和FLP工具鼠杂交后去掉阳性标记的neo基因即可得到被loxp位点瞄定的flox小鼠。

    2.2 cre鼠模型的构建

    cre酶是一种外源性的重组酶，单纯在生物体内不存在。为了启动cre重组酶在生物体内的表达，需要设计特异性启动子启动其在生物体内的表达，可以选择特定部位、特定时间表达的基因作为启动子，这样就达到了研究特定基因在特定的时间、特定部位表达的目的。例如，为了研究某些基因的缺失或突变对牙釉质发育的影响，首先应该设计特异性启动子启动cre重组酶的表达。参与牙釉质形成过程中的一些釉原蛋白基因均可启动其特异性表达。将特异性启动子和cre重组酶构建成的载体单酶切线性化后通过琼脂糖凝胶电泳 ......