1.2.3.4 蛋白质印迹法检测P-AKT/AKT通路及caspase-3的蛋白表达情况 收集各组细胞，充分裂解并用超声波细胞破碎仪进行破碎处理，放置样品细胞间的粘连;随即在100 ℃恒温水浴中进行蛋白变性，并用BCA法测定样品蛋白浓度，-20 ℃保存待用。将标记蛋白的masker和各组样品加样到已经装好电泳液的电泳胶槽后，进行蛋白分离电泳，随即根据目标蛋白切胶，进行转膜电泳，将电泳胶上的目标蛋白转到相对稳定不易碎的PVDF膜上，将PVDF膜放入5%脱脂奶粉的封闭液中30 min，TBST洗膜后孵育P-AKT/AKT、caspase-3和GAPDH一抗，4 ℃孵育过夜TBST洗膜后孵育各指标相应的二抗，室温孵育2 h，TBST洗膜后ECL发光，在凝胶成像系统上查看各组蛋白条带及其灰度值。

    1.3 统计学方法 采用SPSS 20.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示。首先对各组数据进行正态性及方差齐性检验，若呈正态性分布且方差齐，则采用单因素方差分析(one-way ANOVA)同时选择最小显著性差异检验(Least Significant Difference ......