当前位置: 首页 > 期刊 > 《中国中药杂志》 > 2017年第19期
编号:13105902
建泽泻鲨烯合酶原核表达、功能验证及其免疫检测研究(3)
http://www.100md.com 2017年10月1日 《中国中药杂志》 2017年第19期
     2.4 原核表达蛋白体外酶促反应 酶促反应体系[21]:总体系为200 μL,5 mmol·L-1 FPP,50 mmol·L-1 MgCl2,25 μmol·L-1巯基乙醇,25 μmol·L-1 NADPH,0.8 g·L-1AoSS蛋白纯化产物,pH 7.2 磷酸缓冲液补足,上覆400 μL正己烷,在35 ℃反应2 h,充分涡悬振荡后1万 r·min-1离心,取携带空载体菌液提取的蛋白代替AoSS蛋白,其他组分不变,作为对照组,采用气质联用仪(GC-MS)对催化产物进行检测。GC-MS条件:电离方式EI,电子能量70 eV,载气为氦气,进样口温度260 ℃,120 ℃ 3 min,以15 ℃·min-1升至180 ℃,再以25 ℃·min-1升至260 ℃,保持25 min。

    2.5 多克隆抗体制备及纯化 将纯化蛋白免疫新西兰白兔(2~2.5 kg),皮下免疫400 μg/次,2~3周免疫1次,免疫4次。采血检测,通过间接ELISA方法确定抗血清针对蛋白的效价,待效价大于1∶5万 进行最终采血制备抗血清 ......
上一页1 2 3 4 5下一页

您现在查看是摘要页,全文长 4155 字符