玄参内生真菌分离、鉴定及系统发育分析(2)
2.2 内生真菌鉴定2.2.1 形态观察 观察培养的内生真菌菌落形态，对照《真菌鉴定手册》[11]，根据菌落以及菌丝体和孢子的形态特征进行鉴定。
2.2.2 分子鉴定 采用Takara9164和RR178试剂盒对分离出的内生真菌进行基因组 DNA 提取及26S rDNA D1/D2区域序列 PCR扩增。
真菌基因组DNA提取：挑取少量菌丝体于1.5 mL EP管，加入Takara 9164 真菌裂解液50 μL，80 ℃水浴15 min，4 000 r·min-1离心，取上清液作为PCR模板。
PCR(50 μL) 体系：ddH2O 20 μL；PCR premix(Takara) 25 μL；真菌DNA模板 4 μL；D1/D2 Forward Primer和D1/D2 Reverse Primer(Takara)各0.5 μL PCR扩增条件：94 ℃ 5 min ......
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