3.6重组SmWRKY1蛋白的蛋白免疫印迹

    上述纯化好的蛋白，先进行SDS-PAGE凝胶电泳，接着电转膜，拿His-Tag一抗和HRP标记的羊抗小鼠二抗孵育后，显影，结果显示His-Tag单克隆抗体可以特异性的识别重组蛋白SmWRKY1(图 10)，说明SmWRKY1蛋白在大肠杆菌中已成功的表达。

    4讨论

    WRKY转录因子在植物的生长发育过程，植物对环境胁迫因子的响应应答，以及植物代谢等方面起着很重要的作用。大肠杆菌作为表达外源基因的受体菌，虽然有缺乏对真核生物蛋白质的复性功能和修饰加工系统；内源性蛋白酶会降解空间构象不正确的异源蛋白；细胞周质内含有种类繁多的内毒素等劣势，但是有更加明显的优点，如遗传背景清楚；基因克隆表达系统成熟完善；繁殖迅速；培养简单；操作方便；遗传稳定等。大肠杆菌作为常用的融合蛋白表达系统，影响其表达的因素很多，为了使蛋白的表达量达到较好状态，除了选择合适的载体，适当的表达菌株之外 ......