对象与方法

    一、研究对象

    选取2014年11月至2015年12月我院收治的ⅢB～Ⅳ期NSCLC合并MRE(经细胞病理学证实)患者22例，所有患者均抽取外周血及胸腔积液标本。其中男13例、女9例，年龄35～70岁、中位年龄50岁，腺癌20例、鳞癌2例。本研究经医院医学伦理委员会批准，所有患者均已经签署知情同意书。

    二、方法

    1采集血样及抽取胸腔积液

    清晨在患者空腹状态下抽取肘静脉血5 ml，立即在室温下以2 000转/分离心10 min，分离血浆和血细胞，小心采集上层血浆，注意避免触及血细胞。临床抽取新鲜胸腔积液样本约15 ml，同样以2 000转/分离心10 min，弃上清。如细胞量过少，可重复加入胸腔积液后再离心。

    2血浆和胸腔积液样本DNA提取

    用Qiagen DNA提取试剂盒提取血浆和胸腔积液样本中的DNA，具体操作参照试剂盒说明书进行。

    3ctDNA分离

    应用薄膜柱吸附试剂盒分别从血浆和胸腔积液中分离ctDNA：将DNA定量后按试剂盒说明书取20 ng以上进行DNA文库构建 ......